Yeni Bulunan Titrasyon Reaktifi Amilaz Enzimini En İyi Şekilde Belirleyebilir
Fotoğraf: Reaktif, doymamış bir siklitol eter üzerine yüksek oranda reaktif bir florojenik ayrılma grubu eklenerek elde edilir.
Kanada ve Danimarka’daki bilim insanları tarafından saf bir enzim karışımından α-amilazların konsantrasyonunun ve aktivitesinin belirlenmesine izin veren bir reaktif geliştirildi. Bu reaktif, araştırmacıların endüstriyel uygulamalar için yeni α-amilazları seçmesine ve optimize etmesine yardımcı olabilir.
α-amilaz, daha basit karbonhidrat zincirleri elde etmek için nişastadaki α-1,4 glikozidik bağların hidrolizini katalize eder. İnsan tükürüğünde en bol bulunan enzimdir, ancak aynı zamanda gıda, kağıt ve biyoyakıt üretimi için endüstride kullanılmak üzere mantar, maya ve bakterilerden de elde edilir. Dünya enzim pazarının %25’ini α-amilazlar oluştururken, α-amilazların depolanması zor, üretilmesi pahalı, geri kazanılması ve yeniden kullanılması zor olabilir. Bu nedenle, belirli uygulamalar için en iyi sonuçları elde etmek amacıyla yeni veya geliştirilmiş α-amilazların arayışı için çok çeşitli çalışmalar yapılmaktadır.
Bu arayışa yardımcı olmak için, British Columbia Üniversitesi’nden Stephen Withers ve grubu şimdi α-amilazlar için aktif bölgeleri üzerinden ölçüm yapabildikleri titrasyon reaktifini geliştirdiler. Withers,” Bu alanda en önemli eksik olan şey, enzimin tam konsantrasyonunu hızlı bir şekilde ölçememekti çünkü ürettiğiniz en iyi enzimi veya en iyi mutant enzimi seçmenize yardımcı olmak için ihtiyacınız olan önemli bir parametre konsantrasyondur.” diye açıklıyor. Reaktifimiz, çok az miktarda enzim ile enzimin konsantrasyonunu ve aktivitesini doğru bir şekilde ölçmenizi sağlar.’
Grup, reaktifi bir florojenik bırakma grubunu doymamış bir siklitol eterin üzerine takarak oluşturdu, böylece enzimin aktif bölgesiyle temas ettiğinde son derece hassas bir florofor serbest kalarak ölçüm sağlıyor.
Benzer reaktifler diğer enzimler için de mevcuttur, ancak bu α-amilazlar için böyle bir reaktif hazırlamayı başardıkları ilk an. Withers, mutant enzimleri tararken yeni reaktiflerinin ‘hemen kullanılabileceğini’ söylüyor.
Danimarka Teknik Üniversitesi’nden enzim ve protein kimyası uzmanı Birte Svensson, “α-amilazlardaki aktif bölgelerle stokiyometrik ve geri dönüşümsüz olarak reaksiyona giren inhibitörlerin üretilmesinin kimyasal zorluğunu çözdüler” diye açıklıyor. ‘Reaktifin prensibi, bir kromoforun bir hidroksile siklohekzen halkasının bir enol eterinden salındığı yeni bir glikozidaz substrat türü için tasarlanan yüksek kon ve son derece düşük koff oranlarına dayanmaktadır.’(Kd: koff / kon)
Withers ve ekibi daha önce terapötik uygulamalar için insan amilaz inhibitörlerini bulmak için çalıştı ve bir aday kan şekeri seviyelerini kontrol etmeye yardımcı olup olmadığını görmek için faz 1 İnsan klinik denemeleri için onaylandı. Bu çalışmada geliştirilen titrasyon Reaktifi, diğer terapötik amilaz inhibitörlerinin keşfinde yardımcı olabilir.
Kaynak: chemistryworld.com
